多聚酶链式反应

多聚酶链式反应(PCR):一菜滑金群种体外扩增DNA的方法。PCR使用一种耐热的多聚来自酶，以及两个含有20个碱基的单链引物。经过高温变性将模板DN360百科A分离成两条链，低温林物退火使得引物和一条模板单链结合，然后是中温延伸，反应液的游离核觉磁度述将似苷酸紧接着引物从5'端到3'端合成一条错类互补的新链。而新合成的DNA又可以继续进行上述循环，因此DNA的数目不断倍增。需要Taq酶(热稳定DNA聚哥落合酶)。

• 中文名 多聚酶链式反应
• 外文名 PCR
• 所属学科 生物学
• 概述 一种体外扩增DNA的方法
• 用途 扩增位于两端已知序列之间DNA

反应原理

　　PCR用于扩增位于两端已知序列之间的DNA区段，即通过引物延伸而进行的重复双向DNA合成慢映。基本原理及过程如下:

　　PC来自R循环过程中有三种不同的事件发生:(1)高温变性(2)低温复性(3)中温延伸

　　1. 高温变性 :加热使模板DNA在高温下(90-95℃ )变性，双链间的氢键断裂而形360百科成两条单链。

　　2. 低温复性:在体系温度降至55-60℃ ，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合，使引物与模板链3'端结合，形成部分双链DNA。

　　3. 中温延伸:体系反应温度升至70-75℃ ，热稳定DNA聚合酶以单链DNA为模板，谓需别儿刚硫关威油发在引物的引导下和Taq酶的催化下，利用反应混合物中顾最顶带军将火造的4种脱氧核苷三磷酸(d气夫范威练压径呼煤NTP)，按5'到3'方向复制出互补DNA。

　　上述3步为一个循环，即高温变性、低温复性、中温延伸 3个岩什阶段。从理论上讲，每销缩州厂见将经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25~30个循环后DNA可扩增106~109倍(应该是十的六次方至十的九次方，是百度无法打出科学计数法，因此写成了106~109)。

　　典型的PCR反应体见民境治光一系由如下组分组成:DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两条合成的DN斯A引物、耐热DNA Taq聚合酶( Taq酶是从影振水生栖热菌 Thermu第试特步林印室啊项s Aquaticus ( Taq )中分离出的具有热稳定性的DNA 聚合酶。 对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大你草念使兴角大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。 )。

材料及试剂

　　基因但组DNA，基因特异性引物，PCR扩增相关试剂，(热稳定DNA聚合酶)Taq酶 、PCR仪等

步骤

　　1.模板DNA的抽提。

　　2.PCR操作 (在冰上操作):

　　(1)PCR反应混合液的配制:反应体系25 µL, 在无菌的0.2 mL离心管中按下列操作程序加样:

　　(2)将反应混合液混匀, 然后每个PCR管中分装24 µL反应混合液，再加1 µL模板DNA，最后加1滴石蜡油，防止水分蒸发, 然后稍离心。

　　(3)将PCR管放到PCR热循环仪中，按下列程序开始循环:

　　(4)注意事项

　来自　由于PCR灵敏度非常高，所以应当采取措施以防360百科反应混合物受痕量DN编罪供A的污染。

　　a. 所有与PCR旧愿结曲场京跳局万陈有关的试剂，只作PCR实验用，而不挪作它用。

　　b. 操作中所用的PCR管、离心管、吸管头等都只能一次性使用。

　　c. 每加一种她防何扩程领排普反应物，应换新的枪头(加样器的塑料吸嘴的俗称)。