排阻buffer是一种化学物质,常被用于生物学研究中的核酸电泳实验中,主要作用是用来减弱DNA或RNA等带电荷分子在电场中运动速度的影响,从而起到减慢、甚至阻止核酸迁移的作用。
在DNA电泳实验中,排阻buffer可使DNA序列在电场中的迁移速度变慢。因为DNA带有负电荷,在电场中会受到电场力的作用,向正极移动。但在电泳过程中,由于DNA分子在电泳缓冲液中所占比例较小,所以经常出现DNA分子过度迁移或在凝胶上形成多个束带的现象。使用排阻缓冲液能有效减缓在电场中移动的DNA的速度,从而减少这种干扰。
电泳过程中会产生热,可能会导致凝胶变形、分离和破裂。排阻buffer在含有电荷的聚丙烯酰胺凝胶电泳中作为运转介质,可以派上用场问题。特别是在长时间运行过程中,使用排阻buffer可以消除电泳过程中的热能,从而减少凝胶的失真和破裂。因此使用排阻缓冲液对于维持实验的稳定性也是非常重要的。
排阻buffer含有的缓冲盐能够稳定电泳液的酸碱度,因此在电泳实验中可以用来调节pH值。这对于保证酶催化、分子鉴定和杂交反应等在凝胶表面的有效进行非常重要,从而能够使实验结果更加可靠。
TAE缓冲液是最常见的排阻缓冲液之一。它由三种物质组成:三乙酸(Tris)、乙酸(Acetic acid)和 EDTA(乙二胺四乙酸)。TAE缓冲液可以调节电泳液的pH值,是传统的核酸电泳用缓冲液。
TBE缓冲液同样由三种化学物质组成:三羟甲基氨基甲烷(Tris)、类似醋酸的硼酸(Boric acid)和EDTA。TBE缓冲液和TAE缓冲液一样都是核酸电泳凝胶最常用的两种缓冲液之一。
SB缓冲液由盐(NaCl)和两亚甲基蓝(Bromophenol blue)组成,是一种高浓缩的电子移动介质和样品混合物,主要应用于核酸凝胶电泳。由于SB缓冲液的混合物含有罗丹明B和溴酚青(xylenol orange),因此可以直观地观察到DNA和RNA移动的位置。