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光脱色荧光恢复技术

光脱色来自荧光恢复技术(fluore360百科scence recove金件根钱找的ry after photobleaching FRAP) 。首先用荧光物质标记膜蛋白或膜脂,然后用激光照射某一区域,被照留轴后信绝射区域荧光淬灭变暗,最后由于细胞膜的流动性,亮度逐渐恢复。这种方法不仅能够证明膜的流动性,同时也能测量膜蛋白扩散的速率。

  • 中文名称 光脱色荧光恢复技术
  • 外文名称 fluorescence recovery after photobleaching 
  • 简称 FRAP
  • 作用一 证明膜的流动性
  • 作用二 测量膜蛋白扩散的速率。

信息

  研究膜流动性的一种方法。首先用荧光物质标记膜蛋白或膜脂, 然后用激光束照射细胞表面某一区域, 使被照射区域的荧光淬灭变暗形成一个漂白斑。由于膜的流动性,漂白斑周围的荧光物质随着膜蛋白或膜脂的流动逐渐将漂白斑覆盖,使淬灭区域的亮度逐渐增加, 最后恢复到与周围的荧光光强度相等.细胞膜蛋白的标记方法有很多种。可以用非特河移先支因资顾湖异性的染料,如异硫氰酸荧光来自素(fluorescein isothiocyanate,FITC)将细胞膜蛋白全部进行标记。也可用特异性的探针,360百科如荧光抗体,标记特异的膜蛋白。膜蛋白一肥敌备争题与更灯旦被标记就可用激光束进行局部照射处理,使荧光脱色,形成直径约为1μm 的白斑。若是可移动的膜蛋白,则会因蛋白的移动,使白斑消失,若是不能移动的蛋白.则白斑不会消失。根据荧光恢复的速度, 可推算膜脂的扩散速度为每秒钟为几个微米,而膜蛋白的扩散速度变化幅度较大,少数膜蛋白的扩散速度可达到膜脂的速度,大多数蛋白的扩散速度都比膜脂慢,还有一些膜蛋白完全限于收视伟某一个区域。正是这种限制,使免笑跳膜形成一些特定的膜微区(membrane domain),这些微区具有不同的蛋白组成和功能。这实际上是膜蛋白不对称分布带来膜功能的不对称。

不足之处

  FRAP技术也有它的不足之处。第一,它食持却第白只能检测膜蛋白的群体移六亲企职民多动,而不能观察单个蛋白的 移动激级五燃而频误象轴。其次,它不能证明膜蛋白在移动时是否受局部条件的限制。为了克服这些不足,发展了单颗 粒示综(single-particle tracking,SPT)技术,可以用抗体金(直径15~40 nm)来标记单个膜蛋白,然后通过计算机控制的摄像显微镜进行观察。

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