感受态细胞

感受态细胞(com来自petent cell):理化方法诱导细胞，吸收周围环曾学失责制足章绿境中的DNA分子，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。

主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使360百科得细胞膜表面出现植一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性，这种孔洞简丝烟划粉生特酸会被细胞自身所修复。

• 中文名称 感受态细胞
• 外文名称 competent cell
• 主要原理 通过处理使细胞的通透性变大
• 性质 活细胞

特点

　　①细胞表斤入才记布况危百额神溶面暴露出一些可接受外来DNA的位点(以溶菌酶处速星践理，可促使受体细胞的接受位点充分暴露);

　　②细胞膜通透性增加(用钙离子处理，可使内传离鸡原胞章律信府反膜通透性增加，使DNA直接穿过质膜进入细胞);

　　③受体细胞的修饰酶活性最高，而限制酶活性最低，使转入的DNA分子不易被切除或破坏;

　　④受体细胞本身处于非生长繁殖阶段(即受体细胞染色体相对稳定);

　　⑤不存在载体的筛选基因，多采用限制酶阴性、修饰酶阳性的大肠杆菌作为受体细胞。

制作方法

CaCl2法

　　1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯来自化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，360百科同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞

　　细胞壁通透性发生变化，极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖陆律啊这激显句存用绍式核酸酶的羟基-磷酸钙复或扩望她鲜家记合物。

　　联合其它的二价金属离子(如Mn、Co)、DMSO或还原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100~1000倍。

　　2.此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90形在上粉洲第土s)，细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动，并随机出现许多间隙，外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达，实干谓土消样进求序则风配现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。

　　3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。

电转法

　　电击法不需要预先星品直茶尔诱导细菌的感受态，依靠短暂众目县非宣哪验心烈的电击，促使DNA进入细菌，转化率最高能达到10~10转化子/ug闭环DNA。因操作简便，愈来愈为人们所接受。

意义

　　将构建好的载体转入感受态细胞进行表达，不仅可以检验重组载体来自是否构建成功，最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验，如蛋白质表达纯化等工作。

其他基因传递方法

　　详见基因枪法