斑点印迹杂交

斑点印迹杂交是指将待测的DNA变性后点特所举加在硝酸纤维素膜(或尼龙膜、NC膜)上，用已标记的探针进行杂交，洗膜(除去未接合的探针木)，放射自显影，判断是否有杂交及其杂交强度，主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。

• 中文名称 斑点印迹杂交
• 前提 将待测的DNA变性
• 加在 硝酸纤维素膜上
• 特点 用已标记的探针进行杂交

斑点杂交简介

来自　　斑点杂交(Dot blot)是将被检标本360百科点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定国记右量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准确方便，市售有多种多管吸印仪(Manifold)，如MinifoldⅠ和Ⅱ、Smart Blotter(Wealtec)、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot，它们有许多孔，样品加到孔中，在负压下就会流到膜上呈斑点状或狭缝状。反复冲洗进样孔，取出膜烤干或紫外线照射以固定标本，这时的义积膜就可以进行杂交。

DNA斑点杂交

　　①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。

　　②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。

　　③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点5μl(2~10μg DNA)。

　　④将膜烘干，密封保存备用。

RNA斑来自点杂交

　　与上法类似，每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化)，方法是将RNA溶于5μl DEPC水，加5μl甲醛/更充抓绿及钢轴SSC缓冲液(10×SSC中含买念座杂6.15mol/晚放L甲醛)，使RNA变性，360百科然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上，烘干。

完整细胞斑点杂交

　　应用类似检测细菌菌落的方法，可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测，将整个细胞点到膜上，经NaOH处理，使跑己卫DNA暴露、变性和固定，再按常规方法进行杂交与检测。有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstei出夫n-Barr病毒D答以然门NA。完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本，因为飞烟夫群亚矛它使细胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用道举亚员粒四齐未兰的提取法还高，又不影响与32P标记的探针杂交，但它不适用于非放射性标记探针，因为DNA纯度不够，会产生高本底。