指能水解RNA磷酸二酯键的酶称核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)。不同的RNase其专一性不同,例如牛胰核糖核酸酶(RNase I),来自它的作用位点是嘧啶核苷3'一磷酸与其他核苷酸之间的连接键,而核糖核酸酶T1(RNase T1)的作用位点是3'鸟苷酸与其他相邻核酸之间的5'一OH间的连键。
核糖核酸酶,白色粉末。为具有球蛋白性状的一种蛋来自白质。溶于水、50%丙酮。此酶最适宜温度为60℃,85℃以上失去作用,最适宜的pH值为7.6。是催化核歌击车糖核酸水解的一种核酸内切酶,可使胞嘧啶核酸解聚。对胸腺核酸则无作用。用于生化研究。
核糖核酸酶360百科能催化核糖核酸(RNA)的降解,现已能人工合成。药用油膏局部外用于治疗外伤及关节疼痛。据报道,核糖核酸酶能改变宿主细胞新陈代谢,抑制病毒合成,在体外能抑制流感病毒增殖,在鸡胚内能抑制痘苗、疱疹病毒形成。临床用核糖核酸酶每天肌注18氧意息构0毫克,对治疗流行性脑炎有益。
(一)核糖核酸酶A
核糖核酸酶A(RNase A)来源于牛胰脏,是一种内切核糖核酸酶,可特异攻击RNA上嘧啶残基的3'端,切割胞嘧啶或尿嘧啶与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键,来自反应终产物是3'嘧啶核脱无况训夜苷酸和末端带3'嘧啶核苷酸的寡核苷酸。无辅助因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可以被胎盘RNA酶抑制剂(RNasin)或氧钒一核糖核苷复合物360百科(vanadyl-ribonuclosidecomplex,VRC)所抑制。RNase A的反应条件极广,且极难失活。在低盐浓鲜财左高额难五优度(0~100 mmol/l NaCl)下,RNase A切割单链和双链RNA、DNA:RNA杂交文比放管准爱副精元雨片体中的RNA;当NaCl浓度为300 m方负明衣mol/l。或更高时,RNase A就特异性切割单链RNA。去除反应液中的RNase A,通常需要蛋白酶K处理、酚反复抽提和乙醇沉淀。在分子克隆中,场治知吧者试核糖核酸酶A的主要用途为:
①从DNA:RNA杂交体中去除未杂交的RNA区。
②确定RNA或DNA中的单碱基突变的位置。在RNA:DNA或RNA:RNA杂交体中,若存在单碱基错配,可用RNAse A识别并切割。通过凝胶电泳分析切割产物的大小,即可确定错配的位嚣。
③RNA检测。RNA酶保护分析法(RNase protection assay)是近年来发展起来的一种检测RNA的杂交技术。其达案他格洋阻弦益路周倒基本原理是利用单链RNA探针,与待测的RNA样品进点即究争厚控另久行杂交形成RNA:RNA双链分子,由于RNA酶可专一性地降解未杂交的单链RNA,而双链受到保护不被降解,经凝胶电泳可以确定目的RNA的长度。该方法灵敏度较Northern杂交法更高,并可进行较为准确的定量。选择适当的探针,还可进行基因映宣及增菜行渐回指转录起始位点分析及内含子(也称内元)剪切位点分析等研究。此法的灵敏度比核酸酶S1保护分析法高数倍。
④降解DNA制备物中的RNA分子。须使用无DNAsd的RNase(DNase I fre难玉外复量e RNase),市售的一般RNase A常含有DN取友乎础ase,可在100 retool/I Tris-CI(pH 7.5)和1老使操不纸联倍都州属例5 mmol/l。NaCI溶液中100℃加热15 min,以去除之。
(二)核糖核酸酶T1
核糖核酸酶践问伤T1(RNase T1)来源于米弱袁立此功食调曲霉(Aspergillus orjzae),它特投异地作用于鸟嘌呤3'端磷酸,切割位点在鸟嘌呤的3'磷酸和相邻核苷酸的5'羟基之问的磷酸二酯键,反应终产物为3'鸟苷酸和末端带3'鸟苷酸的寡核苷酸片段。RN参表法庆验界食治排aseTl的反应条件极广,且极难失活,其催化活性类似于RNase A。
在RNA酶保护实验中,RNase T1与RNase A联合使用,对RNA进行定量和作图;还可用于去除DNA:RNA杂交体中未杂交的RNA区。
(三)核糖核酸酶H
核糖核酸酶H(RNase H)航护核程防最早是从小牛胸腺组织中发现的,其编码基因已被克隆核属后子列到大肠杆菌中。它能特异地降解DNA:RNA杂交双链中的RNA链,产生具有3'一OH和5'一磷酸末端的寡核苷酸和单核苷酸,它不能降判种长察着发影交解单链或双链的DNA或RNA。
在分子克隆中,核糖核酸酶H的主要用途是与大肠杆菌DNA聚合酶工和DNA连接酶一起参加cDNA克隆中第二条I)NA互补链的合成。当用逆转录酶以mRNA为模板合成cDNA第一链之后,用RNase H部分消化mRNA:DNA杂交分子中的RNA,产生的RNA片段就像冈崎片段一样,作为大肠杆菌DNA聚合酶T的引物,以cDNA第一链为模板合成DNA,直到把mRNA全部代替。然后在DNA连接酶的作用下,封闭缺口形成双链cDNA。