实验步骤有哪些 如何利用荧光显微镜检测细胞凋亡

1、收集约106细胞，用冷PBS洗2次。

2、4%福尔马林4℃固定10min左右后涂片，晾干。

3、以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min，水冲净，晾干后观察，以紫外光（340nm）激发hocchest。

4、细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

5、细胞凋亡有别于细胞坏死，它有一系列的细胞形态学和生物化学的改变，包括出现染色体浓缩、DNA降解、凋亡小体的形成等。在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine,PS）位于细胞膜内侧，但在凋亡细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中，Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+的依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。因此将Annexin-V进行荧光素（如FITC 、PE）或生物素（biotin）标记，以标记了的膜联蛋白-V作为探针，利用荧光显微镜检测细胞凋亡的发生。